一、 滅菌
裝袋后菌袋及時送滅菌室滅菌。聚丙烯塑料筒袋采用高壓蒸汽滅菌法，低壓聚乙烯塑料筒袋采用常壓蒸汽滅菌法。具體操作方法參見香菇代料栽培技術有關內容。滅菌時間在95℃ -l00℃下（常壓滅菌）滅菌16-18小時以上．125℃下（高壓滅菌）滅菌3.5-4小時。
二、 接種
平菇菌袋較大不宜采用接種箱接種，一般在面積8-10平方米的接種室或者簡易接種帳內接種較好。接種前首先將接種室（簡易接種帳）清掃干凈，每立方米用甲醛10毫升加高錳酸鉀5克薰蒸。消毒方法是先將甲醛和高錳酸鉀按照用量稱好，把甲醛先放入到接種室或者簡易接種帳內的一空瓶中，再倒入高錳酸鉀，立即關閉門窗密閉24小時，次日打開門窗通風，待氣味散盡后，迅速將滅菌后的菌袋和接種用的一切用具（包括鐵制或木制的三角架或空罐頭瓶、火柴、鑷子、酒精燈、75%的酒精棉球等）放入接種室內，再用甲醛和高錳酸鉀或者氣霧消毒劑密閉消毒，用量減半。由于甲醛具有強烈的刺激性氣味，對人體有害，所以最好在消毒滅菌1小時后再接種。必要時可以戴上防毒面具。
接種前要嚴格選擇栽培種，檢查菌種有無雜菌，菌絲生長是否正常，有無特殊的色素分泌，生長不正常和有雜菌感染的菌種要立即淘汰。菌種要求菌絲生長旺盛，菌齡不可過長，以30天左右為宜。
接種時接種人員穿戴干凈衣帽，戴口罩，嚴格按無菌操作要求進行接種。先用75%的酒精棉球全面擦凈雙手和菌種瓶外壁，然后將菌種瓶放在三角架上或空罐頭瓶上，點燃酒精燈，用75%的酒精棉球擦拭接種用具（鑷子），并經過火焰消毒滅菌（燒紅再冷卻后使用）；打開菌種瓶，用酒精燈火焰在菌種瓶口下方封住瓶口，用經過火焰滅菌的鑷子剔除菌種瓶表面的老化菌種，將要接種的菌種夾碎成花生米大小，在酒精燈火焰附近，打開一頭料袋袋口，將菌種用大鑷子扒入料袋內，使菌種塊平鋪于料袋表面，然后重新用塑料繩綁上袋口。接完一頭，再翻過來按同樣方法接另一頭。此時袋口不要綁得太緊，以利于少量空氣進入，有助于菌絲生長；也不能綁得太松，防止雜菌進入。如此重復直至接完為止。
一般每500克菌種接種15-20袋。接種量不宜過多，也不宜過少，過多容易造成早出菇，從而抑制菌絲生長，過少則發菌速度緩慢，影響出菇時間，而且易造成料袋污染。接種時4人一組合作效果較好，1人負責接種．2人分別負責解開和綁上袋口，另1人負責運送菌袋，這樣既省時又省力。
